動態(tài)光散射(DLS)是一種用于測量樣品中顆粒大小的技術。它的工作原理是將激光照射通過樣品,并測量散射光強度作為角度的函數(shù)。散射光的強度與樣品中顆粒的大小有關。DLS可用于測量從納米到微米的各種尺寸的顆粒的尺寸。它是表征樣品中顆粒尺寸分布的有力工具。
之所以稱為“動態(tài)”是因為樣品中的分子不停地做布朗運動,正是這種運動使散射光產(chǎn)生多普勒頻移。動態(tài)光散射技術的工作原理可以簡述為以下幾個步驟:首先根據(jù)散射光的變化,即多普勒頻移測得溶液中分子的擴散系數(shù)D,再由D=KT/6πηr可求出分子的流體動力學半徑r,(式中K為玻爾茲曼常數(shù),T為絕對溫度,η為溶液的粘滯系數(shù)),根據(jù)已有的分子半徑-分子量模型,就可以算出分子量的大小。
光在傳播時若碰到顆粒,一部分光會被吸收,一部分會被散射掉。如果分子靜止不動,散射光發(fā)生彈性散射時,能量頻率均不變。但由于分子不停地在做雜亂無章的布朗運動,所以,當產(chǎn)生散射光的分子朝向監(jiān)測器運動時,相當于把散射的光子往監(jiān)測器送了一段距離,使光子較分子靜止時產(chǎn)生的散射光要早到達監(jiān)測器,也就是在監(jiān)測器看來散射光的頻率增高了;如果產(chǎn)生散射的分子逆向監(jiān)測器運動,相當于把散射光子往遠離監(jiān)測器的方向拉了一把,結(jié)果使散射光的頻率降低。日常生活中,但我們聽到救護車由遠而近時,聲音的頻率越來越高,也是同樣的道理。實際上我們可以根據(jù)聲音頻率變化的快慢來判斷救護車運動的速度。
光散射技術就是根據(jù)這種微小的頻率變化來測量溶液中分子的擴散速度。由D=KT/6πηr可知,當擴散速度一定時,由于實驗時溶劑一定,溫度是確定的,所以擴散的快慢只與流體動力學半徑有關。蛋白質(zhì)多方面的性質(zhì)都直接和它的大小相關。因此,光散射廣泛應用與蛋白質(zhì)及其它大分子的理化性質(zhì)研究。